研究開発項目1では、α-シヌクレイノパチーに対するアフェレシス療法の有用性の検討を既に治療が完遂しているMSA9症例の経時的な血液・髄液についてIP/RT-QuIC法による解析と同サンプルにおけるプロテオミクスとmiRNA解析も開始した。項目2では、疾患特異的構造抗体の作製を目標として、抗原となる特異的αSynシードの作製を行った。ヒト血液由来αSynを増幅させ、細胞内にトランスダクションした上で凝集体を作製し、レーザーマイクロダイセクションで疾患特異的αSynシードを抽出した。項目3では、脳デリバリーリガンド候補をN-ないしV-リンカーで結合したASOを合成し、マウス尾静脈に投与した。予定通り脳を回収し、RT-qPCRでの評価を進めている。マンガン微粒子経鼻投与下MRI脳伝播解析は、実験は完了し大阪大学小山内研と解析を進めている。項目4ではまずαSyn BAC Tgマウスの嗅球にαSynシードを投与し、１週間後よりぺランパネルを経口投与、凝集体が形成される一次ニューロンと伝播先の二次ニューロンのαSyn病理の解析中である。またSTN-DBSをαSyn凝集体のラットへの脳内投与に先行して行うと、αSyn凝集体のみを投与した場合と比較し、αSyn伝播が抑制された。項目5ではαSynはLLPS誘導より形成されたユビキリン２液滴に取り込まれ、ユビキリン２液滴内でαSynが凝集しアミロイド線維様に変化することが免疫電子顕微鏡観察により確かめられた。次にアルベンダゾールは、JIP4のリン酸化を僅かに増強し、微小管重合を阻害しリソソームを微小管中心周囲に集積させた。そのため、筑波大斉藤毅先生と、アルベンダゾール誘導体の作成、機能解析を進めている。項目6ではpiggyBac transposonシステムとThy1プロモーターを用いてαSyn G51D発現ベクターを構築し、aS (G51D)トランスジーンを保持するメスのF0個体を4匹得ることに成功した。AAVを用いた発現系の構築では、中枢神経系はPHP.B10を、腸管神経系はMaCPNS2セロタイプをそれぞれ採用し、今後αSynフィブリルの腹腔内投与による伝播実験を実施する。