令和6年度の研究計画に沿って、空間的遺伝子発現解析および単一核RNAシーケンシング（snRNA-seq）に適した症例の選択を行なった。その中から、まず2例について１細胞レベルの解像度を有する10xGenomics社のVisium HD空間的遺伝子発現解析プラットフォームを試行した。しかし、想定された１細胞単位あたりの遺伝子数が採取できず原因が同定できなかった。そこで従来型の直径50 μmのドットごとに解析するVisium V2を行なった。今年度は前頭葉7例 [アルツハイマー病（AD）4例、対照3例]、海馬3例（AD1例、対照2例）からデータを取得した。すべての切片で1切片あたり9000~13000程度のドットを解析し、1ドットあたり前頭葉で平均5315遺伝子, 海馬で平均4802遺伝子が採取され、既報やこれまでの自験例に照らし良好な結果と判断した。すべての切片で解剖学的な構造（皮質白質や、皮質や海馬の層構造）に一致したクラスターが描出できた。AD症例の海馬においては、CA1領域から海馬支脚にかけてFTLやFTH1の発現上昇を認めた。連続切片を用いたリン酸化タウ（AT8）およびアミロイドβ（Aβ）免疫染色との対比では、Aβの分布には関連せず、AT8陽性の神経原線維変化や変性突起の密度に関連を認めた。AT8蓄積に伴う変性が描出されていると考えられた。また、前頭葉の切片では活性型アストロサイトマーカーが皮質でびまん性に上昇している一方で、活性型ミクログリアマーカー遺伝子は皮質および白質で不均一な分布で上昇を認めた。現在これらの切片の統合解析を行なっている。また、前頭葉の切片について、同一症例の同一部位で皮質と白質より凍結組織を採取しsnRNA-seqを行なった。RIN値は平均で7以上を示し、snRNA-seq解析に耐えうる試料と判断した。各試料より約9000個の核を単離し、1 核あたり平均で2900遺伝子を検出することができた。これは過去に実施したヒト凍結脳組織のsnRNA-seqと同等の水準であった。取得したsnRNA-seqデータセットおよび空間トランスクリプトームデータとの統合解析を進めている。