ALS19の原因遺伝子ERBB4のタモキシフェン依存性運動ニューロン(MN)特異的コンディショナルノックアウトマウス(cKOマウス)のタモキシフェン投与前、投与後1週後、2週後、4週後の脊髄サンプルを用いたシングルセルトランスクリプトーム解析を行った。投与後1週後ですでにErbb4陽性MNの脱落が認められており、病期進行におけるMN脱落の段階を捉えることができた。さらに、残存MN細胞の続発性遺伝子発現変化も捉えることができ、近隣のMNの脱落に対する代償性変化を捉えている可能性が考えられた。これらの遺伝子変化の中にはMNの機能亢進につながる因子があることが想定され、創薬シーズの萌芽となる可能性が示唆された。さらに、シングルセルの結果の検証系の確立も以下のように順調に進んだ。マウス脊髄組織におけるマウスの運動ニューロンについて、今後の解析のための初代培養系を確立した。研究計画に従い、本年度はマウスを用いて空間トランスクリプトミクスの予備実験を行った。固定条件の異なるマウス脳サンプルを用意し、複数回実験を行うことで安定してデータを取得する実験条件を決定できた。また、空間トランスクリプトミクスデータの取得後に同一組織をαSynucleinで免疫染色することでタンパクの発現量や局在を可視化する実験系を確立することができた。筋萎縮性側索硬化症の病理症例の検討とブレインバンク蓄積を日本ブレインバンクネットと連携して継続した。Xenium等の研究使用が可能な標本準備の基礎的検討を継続した。以上、当初の研究計画を達成した。