１．神経疾患・精神疾患における老化細胞の解析. 1-1: RTTモデルMeCP2 KOマウスとp16-CreERT2-tdTomatoマウスを交配し、正常の野生型マウスとMeCP2 KOマウスにおいて、脳内の老化細胞の出現部位・細胞種の同定を行ったところ、特に大脳皮質と扁桃体領域にp16陽性細胞の蓄積が認められた。また、脳内の主要な細胞種のマーカーに対する組織免疫染色を行った結果、脳内のp16陽性細胞の多くは、ニューロンであることが分かった。1-2: MeCP2欠損老化細胞リプログラミングマウスの作製を試みるために、金沢大学へのMeCP2 KOマウスの導入・クリーニングが完了した。1-3: ヒトiPS細胞『p16-T2A-ZsGreen-P2A-NanoLuc-E2A-Cre-hiPS』作製のためのプラスミド作製を完了した。
２．マウスとヒト脳オルガノイドを用いた精神・神経疾患の治療法創発に資する研究. 2-1: MeCP2 KOマウスとp16-CreERT2-tdTomatoマウスを交配し、MeCP2 KO-(p16-CreERT2-tdTomato)マウスの作製は終了したが、現在このマウスとTLR9 KOマウスとの交配により、MeCP2/TLR9 WKO-(p16-CreERT2-tdTomato)マウスを作成中である。2-2: L1発現増・減コンストラクトのうち、KDコンストラクトを作製した。
３．霊長類レット症候群モデルを用いた神経発達症における細胞老化の検証. レット症候群の霊長類モデルMECP2変異マーモセットを用いて、レット症候群の病態における細胞老化や炎症の関与を示すことを目指し、個体レベルでの検証に先立ち、モデル細胞としてMECP2欠損マーモセット線維芽細胞よりiPS細胞の樹立を行った。山中４因子に加え、LIN28とmp53DDをエレクトロポレーターによってMECP2欠損マーモセット1878M (MECP2 -/Y)の線維芽細胞に導入し、３系統のiPS細胞を樹立した(別紙、図1)。さらに、MECP2遺伝子の変異について解析したところ、３系統のiPS細胞とも1878Mマーモセットが持つ５塩基欠損と同じ変異が検出され、これらのiPS細胞が1878Mマーモセット由来であることを確認できた。また、これらのiPS細胞の核型解析も行い、大多数のiPS細胞の核型が正常であることを確認した。現在、1878Mマーモセット以外のMECP2欠損マーモセットの線維芽細胞からもiPS細胞の樹立を行うと共に、樹立したiPS細胞を用いて神経系細胞へ分化誘導を行っている。