（概要）本年度は、カラム結合構築の解析を行うに必要な基礎技術の開発や基礎情報の取得に取り組んだ。広域感染法については計画通りには進まなかったが、イオントフォレシスによる微小注入法が可能なことは確認し、観察窓を取り付けることで in vivoで蛍光観察が可能なことも確認した。生後すぐ（P5）のマーモセットへのAAV注入も実施し、前頭前皮質のカラム状投射は生後３週までに顕著に発達することがわかった。
1．高度な標識技術を使った成体カラム結合構築の解析
本研究開発項目では、mmオーダーで均一に標識できる注入方法を目指し、セルロース・トレハロースに懸濁したAAVをカバーガラスに塗布、乾燥することでフィルム状にし、観察窓構築とウイルス導入を同時に行う方法を試してきた。手技はまだ不安定ながら観察窓を作ることはできたが、AAVの感染はほぼ起こらなかった。軟膜、くも膜をコラゲナーゼで処理するなど新規手法の導入を試みたがまだ成功に至っていない。またマルチトレーサー実験を共同で行い、マーモセットにおいても同じAAVトレーサーが効率よく発現することを確認した。現在、各トレーサーの識別が可能か検証中である。
2．カラム結合構築の生後変化の解析
生後５日のマーモセット児にAAVトレーサーを注入し、Doxorubicinにより発現をエンハンスすることで、注入の２週間後にカラム構造を可視化することに成功した。この観察から、前頭前皮質のカラム投射が生後すでに成立していることが明らかになった。
3．カラム間情報伝達様式の機能的解析
上述の通り、観察窓作成とウイルス導入を同時に行う方法はまだ成功に至っていない。しかし、in vivoでもトレーサーの蛍光観察ができることは確認できた。今後は、カラム構造を視認しつつ、トレーサー注入を行う実験などを計画している。