本研究では、成獣マウスの頭蓋骨を低侵襲かつ高度に透明化するため、骨組織の屈折率1.56に適合するハイブリッドRIMS（woRIMS）を開発した。wRIMSは生体親和性に優れるものの、屈折率の上限が1.52～1.53と低く、十分な透明化が困難である。一方、oRIMSは屈折率1.56が可能だが、徹底した脱水処理が必要で侵襲性が高い。そこで、尿素を飽和させた75％エタノール水溶液を中間溶媒として設定し、ハンセン溶解パラメータ（分散力・極性力・水素結合力）に基づいて、oRIMS候補#1と#2、wRIMS候補#3と#4を選定した。wRIMS候補については、水和活性、毒性、予測屈折率に加え、呈色の有無を評価し、無着色である#3を選択した。死後マウス頭蓋骨を用いた透明度の定量実験では、屈折率1.56の#1/#3混合液がメタノール/BABBと同程度の透明度を示し、2024年度の目標を達成した。さらに、子宮内電気穿孔法やアデノ随伴ウイルスを用いて蛍光タンパク質やカルシウムインジケータを大脳皮質に発現させた1～2か月齢のマウスに対し、SeeThroughプロトコールによって頭蓋骨を透明化した。open skull法と比較したところ、樹状突起スパインの形態やカルシウム動態を同程度の輝度・解像度で観察でき、かつ炎症反応は大きく抑制されていた。また、最大約400 µmの深さまでの高感度撮影、9 mm²の広視野でのイメージング、10回以上・1か月間にわたる断続的な観察も可能であり、広範な神経回路の機能的解析に応用できることが示された。