本研究開発は、節足動物の刺咬から病態発現までのフラビウイルスの動態を可視化することで、未だ不明であるウイルスの指向性と病態発現の分子機構を明らかにすることを目指すために企図された。令和６年度に得られた成果を以下に記載する。
様々な蛍光タンパク質レポーターおよびペプチドタグを搭載した組換え日本脳炎ウイルスを作製した。得られた組換えウイルスを培養細胞に接種し、増殖性を親株と比較すると共に、蛍光を十分に発するか否かを解析した。その結果、安定的に外来遺伝子を発現し、維持できる組換えウイルスを見出すことに成功した。次に、組換えウイルスを用いて、ウイルス感染標的臓器における感染動態の定量的評価に着手した。すなわち、作出したレポーター搭載組換えウイルスをマウスに接種し、複数のレポーター遺伝子を比較検討した。その結果、シグナルノイズ比が優れた2種類のウイルスレポーター系を特定することができた。さらに、高いシグナルノイズ比と低コストを両立する透明化手法の確立に向けた探索を現在進めており、令和7年度に実施を予定している、ウイルスと宿主細胞の相互作用を解析する手法の開発に着手している。次に、フラビウイルスに感染した蚊の刺咬によるウイルス侵入と全身感染経路の可視化に向けて、蚊に常在ウイルス叢が異なる2系統のヒトスジシマカを用いて人口吸血によるデングウイルス感染実験を実施した。蚊体内におけるウイルス増殖量を検証し、感染感受性の高い蚊株を選定した。また、哺乳類動物への感染性の比較対象として用いる昆虫特異的フラビウイルス（ISFs）のネッタイシマカ、およびアカイエカでの感染増殖性を検証し宿主指向性を明らかにし、適した感染実験系を構築することができた。