本研究にて見出した、赤痢アメーバ症ハムスター感染モデルに対して治療効果を示した2種の開発品について、マウス腸管感染モデルを用いた治療効果の検証を行った。本実験系では用いた赤痢アメーバのマウス腸管への感染定着率が40%程度と未だ系が不安定であるという条件付きではあるが、1つの化合物については陽性対照の既存薬MTZと同等な治療効果を認めた。並行して、優先的開発品2化合物の安全性評価・薬物動態試験について準備を進めた。学内知財部や技術移転企業との連携の結果、米国ベンチャー企業とのMTA契約を締結し、動物試験に必要な量の化合物(各50 mgほど)を調製した。また、新たな化合物を10種ほど合成し、活性評価を行った。赤痢アメーバに対するED₅₀値が50 nM程度の、十分な薬効を示す化合物が継続的に得られている。なお、化合物合成のボトルネックになっていた醗酵法による原薬供給について、大型(90 L)の微生物培養装置を整備することができた。現在、スケールアップ、ダウンプロセッシング等の条件検討を行っている。
第二の検証項目として、MetAP2を分子標的とする過去の臨床開発薬剤FM類の副作用機序発現機構の解析を行った。今年度も、FM類の生体内第二の標的分子X(オフ・ターゲット)に着目し研究を進めた。標的分子Xの遺伝子破壊株を取得したところ、Xの機能損失により細胞増殖の速度が顕著に遅延する表現型が確認された。本変異体にFM類を加えてMetAP2機能を不全化させたところ、細胞生育が阻害された。つまり、MetAP2と標的Xの正の関連性が浮き彫りになった。以上からFM類はMetAP2ならびに標的X阻害を介して毒性を示すことが示唆された。なお構築した赤痢アメーバ／ヒトMetAP2と標的Xの酵素活性評価系を用いて、開発阻害剤の選択性評価を行った。その結果、いくつかの化合物において選択性を見出すことができた。