本実験調査課題では、血液がん細胞上に発現する抗原Xとエフェクター細胞上に発現する抗原Yを標的とした二重特異性抗体のヒト化とヒト免疫細胞移植マウスを用いた薬効評価、ヒト臨床サンプルを用いた抗原Xの発現解析、サイトカインストームのリスク評価、を目的としている。令和6年度は、ヒト抗体配列データベースを用いたアライメントにより類似性の高いヒト抗体配列を選抜し、血液がん上の抗原Xとの結合に直接関与する相補性決定領域 (CDR) を移植したヒト化配列を設計した。ソフトウェアを用いてモデル立体構造を作製し、ヒト化前後での構造の違いが最小限となるような抗原Xに対するヒト化配列を選抜した。設計したヒト化配列に基づき抗原Xに対する低分子抗体遺伝子を全合成し、発現ベクターを構築後、大腸菌発現系等を用いて調製、機能評価を行った。結果、結合能がフローサイトメトリーにより認められたため、ヒト化二重特異性抗体を設計し、同様に全合成遺伝子を調達した。発現ベクターを構築後、動物細胞一過性発現系を用いて調製、機能評価を行った結果、ヒト化前後で各種標的細胞に対する同等の結合能がみられた。さらに、各種標的がん細胞を用いて細胞傷害活性試験を行ったところ、同様にヒト化前後で同等の効果が認められたためヒト化二重特異性抗体作製のマイルストーンを達成した。