近年、液体クロマトグラフィー-質量分析計（LC-MS）を用いた核酸医薬品分析が非臨床安全性試験や臨床試験で多く実施されている。これら分析法では固相抽出法とイオンペア試薬を用いたLC-MS測定が一般的に利用されてきたが、核酸吸着や移動相の劣化など様々な問題が報告されている。本研究では、これら問題の解決を目的として、核酸医薬品に対して特異性の高い前処理法であるハイブリダイゼーション核酸抽出法を開発するのに加え、抽出された核酸医薬品の測定のための非イオンペアLC-MS法の構築を行う。さらに、開発手法の分析法バリデーションデータに基づく判定基準値について論文や専門家会議等にて提案することを目的とする。
本年度はsiRNA医薬品であるルマシランとそのアンチセンス鎖（23–mer）をモデル核酸医薬品として、5’末端にビオチン構造を有する複数種の核酸プローブ（23–mer, 天然DNA、ペプチド核酸、架橋型核酸（LNA）、2-メトキシエチル（MOE）） を用いてハイブリダイゼーション核酸抽出法の抽出条件の最適化を実施し、最大で96.7％の回収率で一本鎖状態のルマシランアンチセンス鎖を回収可能な抽出法を構築した。次にハイブリダイゼーション反応、および核酸プローブと磁気ビーズの結合反応を同時に行う抽出法の時短改良を実施した結果、LNAを導入したプローブを用いた回収率は80.0％であった。一方、いずれのプローブを利用した場合においても、ハイブリダイゼーション温度23℃では二本鎖siRNAの回収率は著しく悪かったため（<10%未満）、反応温度を高温に変更したところ、LNAおよびMOEプローブでは80%以上の回収率を示した。さらに、構築した抽出法を用いて、ルマシランの測定を行ったところ、1-200 ng/mLの範囲で良好な検量線を得ることが可能であった。次年度は、アンチセンス医薬品に対する前処理法の構築、ならびに非イオンペア分析法の分析条件の最適化を実施予定である。