医薬品等の製造販売業者及び行政検査を担当する地方衛生研究所における微量不純物の分析・管理に資するよう、汎用性の高い機器を用いた標準化された分析法や管理方法、リスク評価法の開発等を行うことを目的とした本研究開発課題において、本分担研究は、欧米で報告されているニトロソアミン類の分析法に関する文献の収集・解析を実施した。ニトロソアミン類の高感度で選択的な分析技術の代表例としては、液体クロマトグラフィー質量分析法（LC-MS/MS、LC-HRMS）やガスクロマトグラフィー質量分析法（GC-MS/MS、ヘッドスペースGC-MS）がある。前者は未知のニトロソアミン類の同定（非標的分析, Non-Targeted Analysis）に役立つとされ、後者は揮発性または半揮発性のニトロソアミン類の分析に適している。特にヘッドスペースGC-MSは、サンプルマトリックスの影響を低減するのに役立つとされている。最近各国／地域の規制当局が監視対象として追加したニトロソアミン原薬由来不純物（NDSRIs）は分析が困難とされ、これらのNDSRIsを個別に評価し、適切な分析法を開発することが推奨されている。LC-HRMSは、NDSRIsの特性解析と定量化において重要な役割を果たすと考えられている。ただし、現在広く用いられているLC-MS/MSやLC-HRMSなどの高感度な分析法は、高度な専門知識と高価な機器が必要な点が課題であり、例えば特定の標的に検査対象を限定するなどにより、簡便で低コストな分析法が開発され一次スクリーニング的な用途で使用することができれば、より多くの製薬会社・公的検査機関が効率的に検査を実施することが可能になると考えられた。
研究班全体の成果としては、以下が得られた。1)固相抽出法による前処理を行うことで、HPLC法により医薬品に含まれるNDMAを検出できた。2)医薬品等の化合物の分解生成物の構造を予測するソフトウェアを利用し、ニトロソアミンやニトロソアミン前駆体の生成経路について予測が可能であることを示した。3)モデル医療機器を用いた試料前処理法及び分析条件の検討を実施し、LC/MSによるニトロソアミン類の分析法確立のための基盤を構築した。4)UHPLC-Q-Orbitrap-MSを用いたニトロソアミン類19種類の一斉分析法を確立し、さらに医薬品添加物中から数種のニトロソアミン類を検出した。5) ニトロソアミン類の許容摂取量とリスク評価法の検討を行い、その課題を抽出した。