本研究では、筋線維芽細胞における細胞老化の促進に関与する分子メカニズムの解明を目的として、ある分子に特に着目して解析を行った。まず、老化した筋線維芽細胞においてこの分子をノックダウンしRNA-seq解析を実施した結果、発現が減少する遺伝子群の中に細胞老化と関係すると考えられる遺伝子群が多く同定された。さらに、同条件下でリン酸化およびトータルプロテオミクス解析を行ったところ、Smad3やSRFのリン酸化レベルが有意に低下することが明らかとなった。これらの結果から、着目する分子が細胞老化促進シグナルに関与する可能性が示唆された。現在、これらの解析結果を統合的に解釈し、メカニズムの解明を進めている。
次に、着目する分子の結合分子の同定を目的に、BioID法を用いて着目する分子の近傍に存在するタンパク質を網羅的に同定した。その結果、小胞体に局在する分子の1つが着目する分子と結合することを発見した。この分子をノックダウンすると、老化関連分子の発現が有意に減少したことから、この分子が老化促進経路に関与することが示唆された。今後は、着目する分子はプロテアーゼである可能性があることから該当分子が基質になるかをWestern blotting等で検証し、結合部位や切断部位の同定を進める予定である。
さらに、着目する分子の筋線維芽細胞特異的なノックアウトマウスの作成に向け、floxedマウスおよびKOマウスの繁殖を行い、凍結胚の作成に成功した。当初の予定通りに研究は進捗したと考えている。