加齢に伴い出現する老化細胞は、炎症性サイトカインや増殖因子などを放出する細胞老化随伴分泌現象（SASP）を引き起こし、周囲の細胞に炎症や発がんを促す。これまでに老化細胞自体の解析は急速に進められてきたが、その周辺の細胞に及ぼす影響については空間情報と紐づける必要があるためほとんど理解が進んでいない。またアルツハイマー病に代表される神経変性疾患では、加齢に伴ってRNAとタンパク質が液-液相分離によって凝集した非膜型オルガネラを形成し、その蓄積は神経細胞死を引き起こすが、構成要素のRNAの全貌は未解明である。本研究の目的は、申請者が独自に開発した光単離化学（PIC）による空間トランスクリプトームと空間レギュローム解析により、老化細胞が周辺細胞に与える影響について遺伝子やクロマチンレベルで解明する。これまでに、現行のPIC RNA-seqで使用されるケージ化合物を改良し、二光子励起でZ軸方向の分解能を引き上げることに成功した。また、顕微鏡システムの調整をおこない、目的の組織を共焦点顕微鏡で撮像し、取得した画像における関心領域にたいして二光子励起するためのワークフローを構築した。今年度は照射するレーザーの波長、強度、時間（スキャン回数）を変化させ、RNAを感度良く検出するための実験条件についても検討をおこなった。これと並行して、凝集体に含まれる多様なRNA分子種を検出するためにサンプル前処理も検討し、多様なRNA検出の妨げとなっていたrRNAを選択的に除去する手法を確立した。