内臓痛モデルの作成と評価方法確立
過敏性腸症候群は、精神的ストレスや自律神経失調等により引き起こされるため、本課題では、肛門から遠位結腸にZymosanを投与して過敏性腸症候群モデルを作成した。疼痛評価として、大腸内に留置したバルーンに圧を加えた時（大腸伸展刺激）の外腹斜筋の収縮を筋電図活動の変化で評価した。
神経associate型マクロファージ特異的SNX25 cKOマウスの作製と内臓痛評価
本課題では神経associate型マクロファージに焦点を合わせるため、CX3CR1+のマクロファージでSNX25をKOしたcKOマウス（Snx25Cx3cr1-cKO）で検討した。また、CX3CR1+のマクロファージでSNX25をcKOした細胞をYFP発現するトリプルTGマウスにおける内臓痛も評価した。
内臓痛におけるSNX25-NGFの役割解明
我々はTGマウスの次世代シークエンスおよびcDNAマイクロアレイによる順遺伝学的手法で、感覚不全の原因候補遺伝子として細胞内トラフィッキングに関与するSNX25を突き止めている。さらに、SNX25のノックダウンでは疼痛に重要な機能を持つ神経成長因子NGFの発現が顕著に損なわれることを見出している。NGFは疼痛の惹起に関与するとともに、肥満細胞を活性化させ更なる発痛物質の産生を促進することで疼痛に対してポジティブフィードバック作用を持つ。NGFは有害な侵害刺激時にも分泌量が亢進する報告があることも合わせて考慮するとNGFは感覚受容の中で重要な機能を果たす因子とも考えられた。一方で、マウスにおいて大腸で分泌されるNGFと内臓痛の関係を示した報告は意外なことにほとんど存在しない。予備的データではあるが、リコンビナントNGFを大腸にinjectionして機械刺激に対して敏感になることを見出した。
NGFの分泌様式
NGFは末梢神経に発現するNGF受容体TrkAを介して後根神経節における痛覚因子TRPV1, Naチャネルの発現を調節することが報告されているが、SNX25 KOマウスでも後根神経節におけるTRPV1やNaチャネルの発現が減弱することを見出している。NGFはオートクラインまたはパラクライン様式で分泌量が感覚刺激に伴い増加していると考え、SNX25 KOマウスおよびCX3CR1+神経associate型マクロファージにおいてNGF分泌様式の詳細な時空間様式を免疫組織化学で検討した。