hCLiP-EVがいかにして肝線維化を改善するかの機能解明のため、CDAHFDマウス肝組織を用い、hCLiP-EV投与群と非投与群間で差のある遺伝子の網羅的な解析を、空間トランスクリプトーム解析によって実施した。結果、in vitroでhCLiP-EVを肝星細胞へ曝露した際と同様にActa2やCol1a1の低下が確認できた一方、その上流のメカニズムはin vitroの結果との相違点がみられた。特にin vivoにおいてIL-1βとその下流遺伝子であるLcn2の低下が顕著であり、Lcn2は肝線維化と関連する重要な遺伝子として知られていることから(Sci Rep 10:15558, 2020)、機能維持に重要なmiRNAおよび膜タンパク質の同定に必要なin vitroアッセイ系の見直しを進めている。すなわちhCLiP-EVがIL-1β-Lcn2を低下させる効果を再現するためのin vitro系の構築を行う。また、肝細胞ノックアウトマウス作成のためのCas9マウスの導入が完了し、AAVの最適化を進めている。さらにCDAHFDマウスに加えて、GAN dietマウスに対するhCLiP-EVの投与実験を行い、その肝組織をブラインドで評価した結果、線維化の改善を実証し得た。