本研究開発では、1) HBVトランスクリプトームが関与する発がんや難治化などの病態形成機構を解明し、2) これらを標的とした発がんやHBs抗原産生を阻止する新規治療法の開発基盤を確立すること、3) 循環HBVトランスクリプトームの臨床的意義を分析し診断アルゴリズムにおけるバイオマーカーとしての有用性を確立することを目的として以下の研究を行った。
1）血中循環HBVRNAのバイオマーカーとしての臨床的意義を解明するために、当院のB型慢性肝疾患検体79検体を用いて、パイロット研究を行った。その結果、本評価系はHBe抗原/抗体のステータスの大きく影響を受けること、e抗原陰性例やHBVDNA低値例では検出感度以下となる症例が多いことが判明した。これらの結果を基に、多施設共同研究を進めるうえでの、研究戦略を立案した。また並行して、研究分担者施設における共同研究の倫理申請を進めた。
2）HBV integrationにより生じるトランスクリプトームを解析するために、宿主KMT2BおよびTERT領域のおけるHBV integrationを再現するヒトiPS細胞を樹立した。これらを肝細胞系譜細胞へ分化誘導した際の形質の変化を解析した。特にKMT2BへのHBV integration株では、HBV integrationにより生じるKMT2Bの異常トランスクリプトームが起点となり、細胞周期関連遺伝子のヒストンメチル化を介した発現亢進を認めた。その結果、本細胞では細胞増殖能の亢進を認め、これによる複製ストレスがDNA損傷を惹起し、発がんの初期段階となることを示した。
3）これまで分担者が行ってきたHBVゲノムの部分的なdeep sequence システムを発展させ、HBVのフルゲノムにおけるdeep sequence システムを構築した。本システムを構築するにあたり、第3世代nanoporeシステムにrolling circle amplification を導入することにより劇的にエラー率を改善し得た。また数症例の検討にて、様々な感染病期に応じて多様な部位に欠失や変異が出現することを明らかにしつつある。
4）HBVに対する治療目標として、HBs抗原の低下、消失がある。一方で、現在までHBs抗原を消失可能な薬剤は存在しない。そこで、HBs抗原消失を目指して、HBV-DNAをターゲットとし、Crispr Cas9を用いて最適なHBs抗原低下作用を有するガイドRNAの同定を今年度は施行した。効率的にHBs抗原低下するガイドRNAを同定した。