本研究課題の目標は、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）の病態を悪性化させる老化細胞の細胞種の同定およびその分子メカニズムを解明し、新規治療法の開発基盤の構築を目指す。本年度は昨年度に引き続き、１）MASHの病態進行における老化細胞の特性解析、および２）細胞種特異的Dre発現マウスおよび新規老化細胞可視化マウスの作製、を中心に行った。１）について具体的には、老化マーカーp16発現細胞がtdTomatoで蛍光ラベルされるマウス（p16-CreER/R26-LSL-tdTomato）に対してNASH2 dietによる線維化や発癌を伴ったNASHを誘導し、その肝臓からtdTomato陽性細胞分取し、単一細胞遺伝子発現解析（scRNA-seq）と組織免疫染色によって老化細胞の特性を解析した。scRNA-seqの結果、tdTomato陽性細胞は肝構成細胞のいずれの細胞種においても認められたものの、肝細胞がtdTomato陰性細胞と比較して高い割合で認められた。また、tdTomato陽性肝細胞においてSASP因子（炎症性サイトカイン・ケモカイン）などの発現が高いことが明らかになった。また、組織学的解析によって、前年度のSTAMモデルと同様に、肝細胞癌の腫瘤周囲に存在するperi-tumor肝細胞においてtdTomatoの発現が認められた。peri-tumor肝細胞は近年、肝細胞癌の進展を制御するとされる分画である。２）について具体的には、細胞種特異的に老化細胞を除去するマウスの作製を目指して、肝構成細胞の細胞種マーカー遺伝子座位にDreをノックインしたマウスの作製がおおよそ完了した。また、p21の発現やp53の活性化に注目した老化細胞レポーターマウスの作製も完了した。次年度は作製されたDreマウスとp16-CreER/R26-LSL-RSR-DTRマウスとをかけ合わせ、NASHを悪性化する老化細胞種の同定に挑む。