本研究は、網膜色素変性症によって失明に至った患者の視覚回復に対する遺伝子治療薬の開発を目指している。本年度は、AAV血清型選定のため、ComV1遺伝子を含むAAV2型ベクターならびに当研究室で開発したAAV改変型ベクターを製造委託し、ヒト網膜色素上皮細胞株およびイヌ網膜での感染効率ならびにモデルラットを用いた用量設定試験を実施した。また、PMDA戦略相談を実施して非臨床安全性試験項目の充足性を確認した後、不足項目として指摘された生体内分布試験を実施した。ベクター製造工程を確認するために、委託製造したAAV-ComV1の成分分析を行った。
ヒト網膜色素上皮細胞株を用いた感染効率評価では、AAV2型に比べてAAV改変型ベクターは3倍程度の高い感染効率を示した。また、イヌ網膜を用いた実験では、AAV2型およびAAV改変型ベクターと臨床において使用実績のあるAAV7M8において、導入効率に顕著な差は見られなかったものの、AAV2型は中心部に、改変型ベクターは広範囲に、AAV7M8は周辺部に発現が見られた。POの指摘に基づき、さらにマーモセット網膜で導入効率を検証する予定である。モデルラットを用いた用量設定試験では、低用量群で高い応答が見られた。この委託製造したAAV-ComV1ベクターを分析した結果、目的遺伝子を含むゲノム以外に２つの異なるゲノムが存在することが明らかとなり、ベクター構造を再検討する必要性が生じた。このため、これまで用いてきたCAGプロモーターから神経細胞特異的プロモーターへ変更したAAV-ComV1を作製し、ラットモデルを用いて効果を検証した。その結果、CAGプロモーターより有意差は見られなかったもののより高い応答が観察された。今後、神経特異的プロモーターを持つAAVベクターの成分分析およびGLP試験実施に向けたベクター製造方法の検討を行う予定である。