R6年度の研究開発の律速段階は開発化合物の構造最適化とリード化合物の選択であった。構造展開による最適化に関しては、R6年度で合計６０化合物の合成を行い、目標合成数は達成した。リード化合物の選択に関しては、この６０化合物についてヒトcMLCKとラットcMLCKに対する効果をin vitro kinase assayで評価した。このうち、ヒトとラットの両方のcMLCKに対する活性化作用が強かった化合物を１０化合物を選択し、ヒトのiPS細胞由来心筋細胞での評価を実施することとした。選択した１０化合物のうち２化合物についてiPS細胞由来心筋細胞オルガノイド（ex vivo）での張力増強作用について観察を行ったが、今回は有意な増強作用は認めなかった。今後は残りの８化合物について同様に検討していく予定である。なお、リード化合物の効果判定で使用するiPS細胞由来心筋細胞オルガノイド系に関しては、独自の成熟化法によってiPS細胞由来心筋細胞の成熟化を改良し、より生体の心臓に近い状態での薬剤評価が行えるシステムに改良した。重症心不全組織のcMLCK活性の評価に関しては、新たに２症例を追加した。また、リード化合物のリモデリング抑制効果の評価を行う動物モデルの作成に関しては、モデル作製準備に取り掛かり、現在までに安定したモデルの作成に成功しているう。今後、サンプルを回収して心不全病態形成へのcMLCKの関与とメカニズムの検証を実施する予定としている。