本研究では、革新的がん遺伝子治療モダリティである受容体標的化oHSVの早期臨床応用を目的として、薬事規制に沿った本ウイルス専用大量製造プロセスを開発し、受容体標的化oHSVの安定供給体制を整備する。本研究期間では、まず受容体標的化oHSV専用生産細胞培養系の確立を目的として、ウイルス生産細胞の無血清培地への馴化条件の検討を進めた。複数の無血清培地の検討の結果、標的化oHSV専用生産細胞のソースとなるVero細胞および標的分子を導入したVero-IL13RA2細胞の無血清培地への馴化条件を確立した。次に、無血清培地培養条件下における標的化oHSVの増殖性を評価した。検討の結果、無血清培地の種類によりウイルス増殖に大きな差が見られること、培養温度がウイルス増殖に影響を与えることを見出した。以上の結果により、標的化oHSV製造プロセス構築に最適な無血清培地培養条件の設定を完了した。また受容体標的化oHSV専用生産細胞の構築について、Vero細胞に対するゲノム編集・遺伝子導入条件の検討を行なった。エレクトロポレーション（細胞密度、パルス電圧・幅・数）の条件検討の結果、導入効率が高く、細胞毒性を最小化する遺伝子導入条件を決定した。同条件により、細胞開発における標的遺伝子のゲノム編集を行ったところ、目的遺伝子の顕著な発現減少が観察された。同条件検討はGMP準拠下に対応した環境でも同時に進め、遺伝子導入条件およびシングルセルクローニングの条件設定を完了した。以上の細胞開発は、GCTP適合性を意識し、細胞の入手方法、作製の履歴、適格性、導入遺伝子の履歴、構造等を詳細に記録した。また、細胞培養環境においては、後の製造プロセス開発を鑑み、動物由来成分を使用しないマテリアルの使用および品質に問題がないことを確認し進めた。