本研究は大腸がんおよび子宮体がんの新たな治療標的を探索するため、3つの研究開発項目で構成されている。令和6年度は研究開発項目(1)において、高変異負荷型子宮体がんの同定および全エクソンシーケンスを終了した。集積済みの約1,000例の子宮体がんについて高変異負荷がんを抽出するためにターゲットシーケンスを行った後、高変異負荷がんと考えられる検体を全エクソン解析した。準備段階で収集済みの高変異負荷型大腸がんのデータと合わせて、大腸がんおよび子宮体がんそれぞれ約500例ずつ、合計1,000例の高変異負荷がんの体細胞変異数情報を得た。研究開発項目(2)において、大腸がんおよび子宮体がん細胞株を用いた陰性選択遺伝子のCRISPRライブラリスクリーニングの条件検討を終了した。がん細胞株を用いてCas9発現細胞のクローニングを行ない、Cas9の作動を確認するため、感染マーカーであるBFP蛍光蛋白、ノックアウト確認のためのGFP蛍光蛋白とsgGFPガイドRNAを有するレンチウイルスを作成した。クローニングしたCas9発現細胞に感染させ、フローサイトメーターを用いてGFP蛍光蛋白が陰性化する効率の高い株を準備した。大腸がんおよび子宮体がん細胞株において複数系統を樹立した。研究開発項目(3)では、正常上皮オルガノイドを用いたCRISPRスクリーニング系の確立を終了した。正常上皮オルガノイドを用いたCRISPRスクリーニングを行うため、大腸上皮および子宮上皮の培養条件の最適化を実施した。また、Cas9導入オルガノイドを樹立し、クローニングを実施した。CRISPRライブラリスクリーニング時に必要なレンチウイルスの感染条件の最適化と、ウイルス感染効率の確認を行った。