本研究では、胆管がんのドライバー遺伝子変異であるKras^G12D変異、Tgfbr2欠損、Trp53^R270H変異をClaudin2-CreERマウスとの交配により、胆管上皮細胞特異的に導入した"KTPマウス"、および胆管上皮でCOX-2およびPGE₂変換酵素mPGES-1を発現するK19-C2mEマウスとKTPマウスを交配して作製した"CKTPマウス"の２系統を主に使用する。ドライバー遺伝子変異を導入したKTPマウスでは腫瘍形成は認められないが、遺伝子変異に加えてCOX-2/PGE₂経路を活性化させたCKTPマウスでは、線維性微小環境形成をともなう胆管がんを発生する。令和６年度は、計画した4項目の研究について、以下のように推進し、結果が得られた。【項目１】CKTPマウスに発症する腫瘍間質の微小環境について、蛍光多重免疫染色により、解析した。腫瘍細胞周囲には、主にa-SMA陽性の線維芽細胞、F4/80陽性のマクロファージが浸潤しており、少数のCD3陽性のT細胞の浸潤も認められた。また、好中球やB細胞も浸潤しており、複雑な免疫微小環境が形成されていると考えられた。【項目２】GFPマウスから骨髄を採取し、これをX線照射にて骨髄破壊したCKTPマウスに移植した。その後、タモキシフェン投与によって腫瘍形成させた結果、GFP陽性細胞が胆管がん組織に多数認められたが、GFP陽性のa-SMA陽性細胞はほとんど認められなかった。このことから、微小環境を構成する線維芽細胞(CAF)は、胆管に存在するresidentialな細胞に由来することが明らかとなった。【項目３】KTP、CKTP、野生型マウス、そしてK19-C2mEマウスの胆管組織を対象にRNAシークエンスを行った（共同研究者；橋本先生担当）。その結果、KTPの胆管組織と比較して、CKTPの腫瘍組織では、同じドライバー遺伝子変異があるにも関わらず、Oncogenicな経路がより活性化しており、特にRas経路の活性化が認められた。【項目４】ヒト胆管オルガノイドの樹立を継続的に実施している。現在までに11系統のオルガノイド樹立に成功した。この中の1系統は、前がん病変と考えられる胆管嚢胞性腫瘍（IPNB）検体から樹立したオルガノイドであり、悪性化進展過程の解析に重要な研究材料となる(共同研究者；八木先生担当)。