研究開発計画書に従い、まず葉酸/ピリミジン代謝拮抗薬によるエピゲノム制御を介したSTING/MAVS経路制御機構の解明を実施した。多様な細胞障害性抗がん剤の中で、DNA合成期に細胞周期停止を誘導する葉酸・ピリミジン代謝拮抗薬が、特に非コード領域におけるヒストンメチル化修飾の変化を伴いSTING/MAVS経路の活性化を誘導することを明らかにした。具体的には、遺伝子の転写活性化に関与するH3K4メチル化修飾やH3K27アセチル化修飾は、ペメトレキセド投与により遺伝子近傍領域での修飾レベルの上昇と転写活性の増加が正の相関を示した。一方で、発現抑制に関与するH3K27メチル化修飾およびH3K9メチル化修飾の変動は、遺伝子近傍ではなく、主にヘテロクロマチン領域に集中して認められた。特に、H3K9メチル化が低下したヘテロクロマチン領域においてH3K27メチル化の上昇が観察され、一部のゲノム領域におけるポリコーム複合体の局所的な活性化が示唆された。次に、葉酸代謝拮抗薬投与に伴うSTING/MAVS経路の活性化が奏功や免疫微小環境に与える影響を解析するため、シンジェニックマウスモデルを用いてペメトレキセド投与条件を検討した。具体的には、3LL細胞をC57BL/6マウスの皮下に移植し、腫瘍形成後に複数の条件でペメトレキセドを投与した後、腫瘍組織を回収し、遺伝子発現の変化を解析した。その結果、先行研究で報告されている標準的な投与条件下において、T細胞を誘引するケモカイン、シグナル伝達因子、ならびに腫瘍内のT細胞マーカーの発現上昇等が確認され、免疫応答の賦活化を示唆する知見が得られた。一方で、研究分担者は、ペメトレキセド奏効症例（15症例）および耐性症例（7症例）由来の肺がんオルガノイドの樹立に成功した。またペメトレキセド奏効症例あるいは抵抗性症例の患者由来肺がんオルガノイド合計8症例に対して、葉酸代謝拮抗薬ペメトレキセドを投与した際に変動する遺伝子をRNA-sequence解析により取得した。現在、ペメトレキセド投与時に、奏効症例あるいは抵抗性症例特異的に変動する遺伝子の抽出などを実施中である。また、奏効症例由来のオルガノイドを用いて3Dマイクロデバイス内でNK細胞との共培養実験を行ったところ、ペメトレキセド処理によりNK細胞のオルガノイド領域への浸潤が促進されることが確認された。