金井（研究代表者）：本課題の達成に向けて、Duo-Psyche、HER2-Cupidの製造工程の改良を実現し委託合成を開始した。Duo-HER2は複数の癌細胞株を用いて細胞および動物レベルで薬効が確認され国内治験開始へ向けた非臨床試験計画案を策定した。
徳山（東北大学）：Duo-リンカーの実用的な製造方法確立のため種々検討を行った。今年度は後のスケールアップ合成で障壁となる合成経路の改良を行った。その結果、新たな合成経路の確立に成功した。さらに、Duo-リンカーの合成の最終段階となるシクロプロパン化反応についても、ワンポットで進行する再現性の高い方法を開発した。また、新たに開発したDuo-リンカーの合成経路を用いた場合、既存の手法と比較して合成の工程数を七段階削減することに成功した。
山次（千葉大学）：Duo-リンカーとPsyche-アルキンのクリック反応の最適化を検討し、クリック反応の収率を大幅に改善できた。段階的なスケールアップ検討を行い、28 mgのDuo-Psycheを同一ロットで得ることに成功した。Duo-HER2の品質管理のための分析手法の確立を目指し、Duo-Psycheの血清安定性を評価する分析プロトコルおよび、Duo-PsycheのDARを決定するためのHPLC分析条件を確立した。
杉山（東京大学）：現在の4量体抗HER2-Cupid製造方法には課題があったが、変性剤を用いた巻き戻し工程の条件検討により、4量体形成が進行する条件を見出すことができた。次に、この方法で調製した4量体タンパク質を用いて精製方法の検討を行った。その結果、一部のクロマトグラフィー手法では目的タンパク質のキャプチャーが困難であった一方、別の分離モードを用いた検討では良好なキャプチャーと溶出が確認された。
田中、金井（東京大学）：HER2を発現する4種類のがん細胞株を用いて細胞傷害活性の測定条件を検討した後、HER2を標的とするADCであるEnhertuとの比較検討を行った。その結果、いずれの細胞株においても、Duo-HER2はEnhertuよりも低濃度から細胞傷害活性を示すことが明らかとなった。
土屋（株式会社CompleCure）：国内治験開始へ向けた非臨床試験計画案を策定し、試験受託機関と協議を進めた。本剤が既存のADC薬を凌駕する薬効と安全性を兼ね備えることを探索／検証するために、医薬品規制調和国際会議(ICH)ガイドライン（主にICH S9とS6）に準拠した安全性試験パッケージを計画した。