プライムエディター (PE)は、塩基置換・小規模挿入・欠失を幅広く実現できる編集技術として注目されている。しかし、既存のPEは分子サイズが大きく、in vivoでの応用を可能にするAAVベクターへの搭載に課題がある。また、AAVベクターによって長期的な発現と高い編集効率を得られる一方で、安全性(オフターゲット、免疫応答)や編集の時空間的制御の欠如など、臨床応用へ向けた課題がある。本研究課題では、サイズ制限が課題となるAAVベクターでの遺伝子治療応用を想定し、小型プライムエディター(mini-PE)の構築と、光スイッチタンパク質を導入し安全性・特異性を向上させた光活性化型の小型プライムエディター(mini-PAPE)を開発する。 開発計画としては、逆転写酵素と小型Casタンパク質との最適な組合せを探索し、プライム編集に必要なガイドRNAの設計を行う。最適化したシステムを評価するため、生物発光レポーターを用いた細胞レベルでの検証を実施する。また光スイッチタンパク質を導入し、光照射依存的なプライム編集の制御を検証し、光照射の強度や時間、プライム編集効率の最適条件を明らかにする。