まず、本研究課題で用いるSARS-CoV-2の5’UTRを標的としたsiRNAの配列について、現時点で抗ウイルス効果が確認できている2種類の他に新たに3種類選抜した。また、コレステロール修飾型siRNAのin vitroにおける抗ウイルス効果を調べるために、培養細胞の培養上清に添加したところ、導入試薬を用いて非修飾siRNAをトランスフェクションした際と比較してより多くの量を必要としたが、抑制効果が認められた。
またコレステロール修飾siRNAをPBSで調製し、SARS-CoV-2感染マウスへの治療効果を指標に検討を行った。コレステロール修飾siRNAのPBS処方は、以前検討していた脂質ナノ粒子処方と異なり、siRNA投与自体による毒性は検出されなかった。一方で、比較的高い投与量においても、SARS-CoV-2感染による体重減少などを抑制する効果は検出できなかった。In vivoでの絞り込みには、それ自体モデルの最適化が必要である可能性が考えられる。
さらに、新たにSARS-CoV-2標的siRNAを用いて噴霧急速凍結乾燥法により従来型siRNA粉末製剤 (肺内ナノ粒子形成型)を作成し、吸入剤応用に適した低密度の球状微粒子構造を有するとともに、溶解後に粒子径の均一性に優れたナノ粒子を形成することを確認した。また、新型siRNA粉末製剤の開発に向けて処方・製造条件の再検証を進める中で、少量添加でロイシンよりも優れた肺送達性を付与する新規添加剤の有用性を見出した。この添加剤を用いて作成したsiRNA粉末製剤 (肺内ナノ粒子形成型)について、上記と同様に溶解後に良好なナノ粒子形成能を発揮する一方、マウスへの気管内投与で肺障害性が軽微であることを実証した。