次世代型抗体を生産するトランスジェニックニワトリ作製のために有用と考えられる遺伝子操作技術の開発に取り組んでいる。これまでに、Cre-loxPをベースとして外来遺伝子を細胞ゲノムの特定部位に組み込み可能な始原生殖細胞（Primordial germ cell, PGC）の樹立を行い、このPGCにモデル抗体であるscFv-Fcの発現ユニットをCre-loxPの反応によりPGCの32番染色体に組み込んだ細胞の作製した。scFv-Fc抗体遺伝子を組み込んだPGCの培養におけるscFv-Fc生産や未分化マーカーの発現解析を行い、長期間安定して生産していることを明らかにした。今年度は、scFv-Fc生産PGCをニワトリ発生胚に移植することで、生殖系列キメラニワトリの作製を行った。本法によるPGCの特定染色体部位への遺伝子導入による抗体生産細胞作製の一般性を証明するために、由来の異なるオスあるいはメスPGCを用いたファウンダー細胞作製を行った。また、scFv-Fc以外の次世代抗体生産の例として二重特異性抗体発現ユニットを導入したPGCの作製を行い、PGC培養での二重特異性抗体の生産を確認するとともに、ニワトリ発生胚に移植することで、生殖系列キメラニワトリの作製を試みた。さらに、SRVベクターにより抗体遺伝子を導入したニワトリPGCの作製を行い、PGC培養での抗体生産の評価とニワトリ発生胚への移植による生殖系列キメラニワトリの作製を行った。
また、研究代表者らが開発してきたトランスジェニックニワトリ作製技術を応用して、実際に卵中への次世代抗体を安定高生産できるニワトリの作製・検証を進めている。前年度までにモデル次世代抗体scFv-Fcを発現する複数のトランスジェニックニワトリ個体を得ることに成功した。今年度は、発現安定性の検証を行った。作製したニワトリは血中でscFv-Fcを1年にわたり安定に発現していた。また、成熟後の卵中での発現レベルも検討した8ヶ月全期間を通して大きな変動はなかった。さらに、得られたトランスジェニックニワトリ（G1世代）を交配して得られた次世代（G2）ニワトリにおいても、血中scFv-Fcレベルは親世代と同レベルであることが確認された。発現レベルの個体差は従来のウイルス法などで作製したトランスジェニックニワトリ個体間の個体差よりも小さいことが確認された。