本実験調査では肺癌マウスモデルを用いて、免疫チェックポイント阻害薬抵抗性条件における免疫抑制経路Xの標的検証を行なった。まず、X欠損マウスを作製した。X欠損マウスの飼育、繁殖は野生型と同等であった。正常組織における免疫細胞の分布も野生型と同等であった。また、組織におけるXのタンパク発現が欠損していることをフローサイトメトリー法で確認した。次に、野生型マウスに皮下接種した肺癌細胞株に対する免疫チェックポイント阻害薬抵抗性条件と同様の条件で、X欠損マウスにおける抗腫瘍効果を検討したが、治療抵抗性は解除されなかった。続いて、異所性X強制発現肺癌細胞株を作製した。肺癌細胞株親株を皮下接種した野生型マウスに対する免疫チェックポイント阻害薬感受性条件と同様の条件で、X強制発現細胞株を皮下接種した野生型マウスにおける抗腫瘍効果を検討したが、治療感受性は親株に対する結果と同様であった。以上より、免疫抑制経路Xは直接的な標的経路でない可能性が示唆された。
これら動物実験と並行して、公開シングルセルRNA-seqデータの再解析を行った。他がん種免疫チェックポイント阻害薬マウスモデルにおいても、我々の肺癌マウスモデル同様に、治療抵抗性環境でXの上昇を認めた。また、ヒト肺癌腫瘍環境において、正常組織と比して免疫細胞中のX発現が上昇していることを見出した。これらから、Xは免疫チェックポイント阻害薬負の効果予測バイオマーカーとなる可能性が示唆された。