グリオブラストーマ (GBM) は中枢神経系で最も一般的な悪性腫瘍の1つであり、高い浸潤性と攻撃性を特徴とする。GBMコホートに対する包括的な解析により、炎症性細胞死であるpyroptosisに関連する一連の遺伝子群がGBMの悪性化と相関していることが明らかになっているが、pyroptosisがどのようにGBMの進行に寄与しているかについてはよく分かっていない。本研究ではpyroptosisの実行因子であるGasdermin (GSDM) タンパク質の機能異常 (特に局在制御異常) がpyroptosis異常、ひいてはGBMの悪性化を引き起こすかin vitro、in vivoにおいて検証することを目的とした。In vitroの実験として当初使用を予定していたGBM細胞株（U-118 MG）の入手に時間を要したため、本年度は、Live-cell timelapse imagingに対するprofilingを行い、アポトーシス誘導剤であるStaurosporineを添加した際の１細胞レベルでの経時的な細胞の形態変化をトレースすることに成功した。また、CRISPR-Cas9を用いたマウスのin vivo GBMモデルを構築すべく、本年度は、p53、Nf1、Ptenに対するgRNAを発現するプラスミド設計、および構築を完了した。さらに、in utero electroporation法によりマウス胎児に遺伝子導入を行い、２ヶ月齢の成体マウスの脳切片を作製した。今後、免疫組織染色によって腫瘍形成の成否を評価する。