C末端にHisタグを付加したA5L、A29L、M1R、A35RおよびB6R蛋白質の遺伝子を、人工合成またはウイルスRNAを用いてPCRで増幅し、真核生物発現プラスミド(pCAGGS)にクローニングする。培養細胞で発現させた後にニッケルビーズカラムを用いて精製する。必要に応じて、それぞれの蛋白質の膜貫通領域と細胞内領域を決失させHisタグ配列に置換し分泌型に改変した組換え体を作出する。精製した蛋白質を抗原として用いたELISAの感度と特異性を評価する。 上記のMpoxウイルス蛋白質の中でHisタグとニッケルビーズでの精製法が確立したものから順次使用し、マウスの免疫を開始する。通常の免疫スケジュールで2-3回免疫し、定法によってハイブリドーマを作出する。A29LおよびM1Rは細胞内成熟ウイルス(IMV)の、A35RおよびB6Rは細胞外エンベロープウイルス(EEV)の糖蛋白質であるため、個別に作成したIMVとEEVのストックウイルスを用いてプラック阻害中和試験を行い、得られた中和抗体がどちらのウイルスに対して中和活性を示すのかを確認する。