本研究課題では、これまでの検討からMPXVに対する中和抗体価測定試験を困難にすると考えられた要因の解決を試み、中和抗体価測定試験の標準化を目指す。 研究開発代表者の相内は、ウイルス調製法の検討を行いEEVならびにIMVの表面マーカーおよびウイルスゲノム定量から得られたウイルスの性状解析を実施し、二峰性となるフォーカスサイズの改善を試みる。また、測定検体となる血清濃度が濃いとフォーカスサイズが大きくなる減少を見出しており、これらの原因となる因子の探索も合わせて実施する。 研究開発分担者の吉河は、MPXVにA34R欠損変異を導入し、EEVの大量放出による均一なウイルス液とフォーカスサイズの均一化を図る。ワクシニアウイルスではA34Rの151番目のリシンをグルタミン酸に置換するK151E変異は、放出量を増加させつつ感染性を維持することが示されており、MPXVにも導入して同様の効果を検証する。さらに、ルシフェラーゼ発現ユニットを導入した組換えMPXVを作製し、従来のプラークカウントに依存しない中和抗体評価系の迅速化と定量化を試みる。