von Willebrand因子（VWF）は血液中の止血因子で、ADAMTS13によって切断され分子サイズが調整されている。ADAMTS13のVWF過剰切断による後天性von Willebrand症候群（AVWS）と呼ばれる出血性疾患が存在する。大動脈弁狭窄症やECMO、補助循環用ポンプカテーテル(IMPELLA)などの機械的補助循環によって発症することが報告されている。現状の治療法は、新鮮凍結血漿やVWF含有製剤を投与するのみで短期的な効果しか期待できないため、ADAMTS13活性を阻害することで治療することを想起した。
我々は既にADAMTS13活性を阻害する抗体を作成し、ヒト化に成功している。本研究では以下の5項目を実施した 。(1)ヒト化A10の製造方法の検討：非臨床試験で用いるヒト化A10をGLPで製造する工程を検討し、リサーチセルバンクから最適なクローンを選択し、品質の評価を行った。その後、最適な製造プロセスを確立し、非臨床安全試験やin vitro, in vivoの薬効検討に必要な十分な量を作成できる方法を確立した。 (2)ヒト化A10の非臨床安全性試験：カニクイザルに対してヒト化A10製剤を投与した場合の血中薬物濃度測定法を確立し、GLP安全性試験（毒性試験）を実施した。また、ヒト化A10製剤を投与した場合に懸念される製剤に対する抗体の測定法も確立した。 (３)ヒト化A10のin vitro薬効検討：ヒト化A10のin vitroでの薬効を、ヒト血液を使ったPCPSを組み込んだ還流装置とLVADの還流装置において確認した。(4)ヒト化A10のin vivo薬効検討：ヒト化A10のin vivoでの薬効を、カニクイザルにPCPSとLVADを装着することでヒトと同様にAVWSを発症するモデルで確認した。 (5)サルADAMTS13に対するヒト化抗体の結合親和性の確認：非臨床安全性試験の結果をヒトに外挿するために、サルADAMTSに対するヒト化抗体の結合性を評価した。CHO細胞発現系を用いてサルADAMTS13を調製し、サルADAMTS13に対するヒト化抗体の結合親和性をELISAで確認した。
First in human試験の実施に向けて、ヒト化A10の製造方法の確立、ヒト化A10のin vitro、in vivoの薬効を明らかにすることができた。