我々は岡山大学病院の遺伝性骨・軟部腫瘍外来でフォローしているLTS群とMI群の複数のNF1患者および健常者から同意を得て、末梢血単核球を採取した。末梢血単核球からのDNAの抽出および遺伝学的検査は、登録衛生検査所であるかずさDNA研究所に外部委託し、NF1, NF2, SPRED1 のExonとその両端のスプライス部位領域について、次世代シークエンサーで解析した。次に、末梢血単核球を用いて疾患特異的iPS細胞を樹立し、神経堤幹細胞を経てシュワン細胞前駆体 (SCP) へ分化させ、神経線維腫モデルを作製した。作製したSCPと採取した末梢血単核球が同じNF1の病的バリアントを有していることをTargetシークエンス解析で確認した。また、樹立したiPS細胞を理研 BRC バンクへ寄託した。樹立した疾患特異的iPS細胞から神経堤細胞を経て、シュワン前駆細胞への分化誘導を行った。その後、末梢血単核球から疾患特異的iPS細胞の樹立の技術が安定し、令和6年3月に疾患研究者へiPS細胞技術の移転を行った。さらに、SCP を用い、NF1神経線維腫モデルを作成した。LTS群とMI群のNF1患者由来のSCPと健常人由来SCPの細胞形態や増殖能を比較した。NF1患者由来のSCPは細胞が不均一で核が濃く、腫瘍に類似した形態であった。増殖能はLarge Deletion例 >Truncating mutation例 > Missense mutation例 > 健常人例であった。したがって、in vitroにおいて、genotype-phenotype correlation（遺伝子型－表現型相関）を示すことができた。　また、これらの群のSCPを用いてＲＮＡシークエンス解析を実施し、腫瘍の増殖に関わる遺伝子や形態変化に関わる遺伝子を同定した。次に、健常者とLTS群とMI群のNF1特異的iPS細胞から誘導したSCPをラットの坐骨神経に移植した。HE染色および蛍光免疫染色にて、NF1 由来SCPが生着し、腫瘍を形成していることを確認した。一方、健常者群では生着を認めなかった。また、PS・POの指示に基づき新規の課題として変異NF1遺伝子のisogenic control株を作成した。
以上のように、代表者らは、研究期間内に、疾患特異的iPS細胞を用いた病態解明・創薬研究課題の最大の目的である、疾患研究者とiPS研究者の協働による新規モデルの確立に成功し、樹立したiPS細胞を理研 BRC バンクへ寄託した。さらに、LTS群由来のSCPは、MI群や健常人由来SCP に比べ増殖能が高いことが明らかになり、genotype-phenotype correlation（遺伝子型－表現型相関）を示すことができた。このデータは、genotypeと臨床症状との関連の知見と類似しており、真の臨床ニーズを反映したNF1モデルを完成することができたと考えている。