「リンパ腫細胞におけるハイブリッド遺伝子変異のクローン進化の追跡」、並びに「ハイブリッド遺伝子変異がもたらすリンパ腫時空間的不均一性の解明」を目的に、シングルセル遺伝子変異・タンパク発現同時解析と免疫細胞シングルセル・マルチオミックス解析のシークエンスを実施した。今年度は、空間シングルセル・マルチオミクス統合解析を進め、ゲノム全体のコピー数異常（Copy Number Instability; CIN）に着目し、同一リンパ腫組織内で多様なCIN値を持つリンパ腫クローン細胞群が、特徴的な局在を有していることを見出した。また、再発時検体では腫瘍浸潤マクロファージがリンパ腫組織全体へび慢性に広がるなど、時間的・空間的変化が確認された。さらに、中枢神経リンパ腫(PCNSL)についても上記同様に空間シングルセル・マルチオミクス解析を実施し、形質芽球（PBL）に類似したリンパ腫細胞群（PBL-like細胞群）を新たに同定した。これらPBLに起源を持つリンパ腫細胞はMYD88, CD79Bが高頻度に変異し、また、細胞間クロストーク解析により、PBL-like細胞群がCD70-CD27を介して、メモリーT細胞を中心とした特徴的な微小環境構造を形成することを見出した。さらに、免疫染色を用いた拡大解析（n=58症例）による臨床的意義の検討では、PCNSL患者の約40%に、CD138陽性-PBL細胞群が存在し、さらにPBL細胞周囲のCD3+細胞浸潤が低い患者は予後不良であることも明らかとなった。（Kobayashi H et al, Blood Neoplasia 2025）。
また、ヒト由来B細胞性リンパ腫細胞株を用いたリンパ腫浸潤xenograftゼブラフィッシュモデルの樹立に成功し、EZH2変異型モデルでは、EZH2阻害剤とマクロファージチェックポイント阻害剤（抗CD47抗体・magrolimab）併用療法は、単剤に比べ有意な腫瘍抑制効果を認めた。また、本研究では96ウエルプレートを用いて、多数の検証（異なる投与量・タイミングなど）を同時に実施し、短期間で上記結果を得た（in vivoドラッグスクリーニングシステムの確立）。現在、EZH2阻害剤によるマクロファージ浸潤のメカニズムや、微小環境細胞のクローン構造変化に与える影響など、EZH2阻害剤によるマクロファージチェックポイント阻害剤増強効果の作用機序の更なる解明を目指す。