これまでの研究からヒストンメチル化酵素KMT2Fの天然変性領域近傍に結合する蛋白質としてBOD1Lを同定し、その欠損はKMT2Fを欠損した際と極めて類似する遺伝子発現プロファイルを示した。天然変性領域に対する抗体技術による阻害効果が限定的であったことから、天然変性領域の機能を制御する分子が新たな創薬標的になると考え、その解析を進展させた。
星居（研究開発代表者）：
BOD1Lは急性骨髄性白血病患者にて高発現を認め、CRISPR-Cas9技術を用いた機能阻害アッセイから、白血病モデルマウスにおいて発症を抑制した。BOD1Lを欠損させるとクロマチン上に結合するKMT2Fが顕著に減少することが明らかとなった。BOD1L欠損細胞ではKMT2F欠損細胞と同様にRNAポリメラーゼの蓄積やヒストン修飾H3K36me3の減少が観察された。構造モデリングからKMT2FとBOD1Lが直接的に結合する様式を解析し、BOD1LのN末端側に存在するShg1ドメインがKMT2Fとの結合に必須であることを見出した。結合自由エネルギーを算出した結果から、BOD1LとKMT2Fの結合に必須となるトリプトファン残基を見出し、単一アミノ酸の変異体解析からもBOD1LがKMT2Fとの結合とそれに伴う白血病細胞増殖に必須であることが証明された。以上の結果から、BOD1LのShg1ドメインは新たな白血病治療薬の創薬標的になることが明らかとなった。精製されたBOD1LとKMT2Fのタンパク質はin vitroで結合することが検証されたことから、タンパク質間相互作用を検出可能となるHTSアッセイ系の構築を試み、創薬の基盤となる技術の開発に成功した。テストアッセイからヒット化合物の取得にも成功した。
小笠原（研究開発分担者）：
KMT2FとBOD1Lとの詳細な結合様式を立体構造解析により取得すること、また、タンパク質間相互作用HTSアッセイ系において、精製KMT2Fが多量に必要になることから、KMT2Fの大量発現系の構築を検討した。HEK細胞の浮遊培養システムに適応した独自のベクターへKMT2F、および発現量を概算するための蛍光タンパク質を導入し発現プラスミドを構築した。遺伝子導入後の培養時間などを検討した結果、1L培養あたり2-4mg相当のKMT2F発現量を得ることに成功した。