本研究では、膝関節における外傷性軟骨欠損、および変形膝関節症を対象としたiPS細胞由来ヒト軟骨前駆細胞を使用した再生医療製品の開発のため、想定する非臨床試験項目を予備的に実施しながら、適宜PMDA事前面談・対面助言を実施し、最終的に非臨床試験項目の策定ならびに産学協働体制の確立を目指す。非臨床薬理試験の予備検討として、ミニブタにて免疫抑制剤の有効適正血中濃度を得るための方策と、整形外科医の立ち合いのもとでのブタ膝関節軟骨欠損部作製方策、およびChondro-plateの移植方法について検討を行った。有効血中濃度を維持するためのタクロリムスの投与方法、投与量、投与間隔についての最適化に成功し、ミニブタでの非臨床薬理試験の準備を整えることができた。これを踏まえて作製したChondro-plate、あるいは骨化防止処理済みChondroplate （特願2022-158123）を軟骨欠損部に移植したところ、組織体の生着を確認することができ、ホスト側関節軟骨との境界面での癒合も確認することが出来た。ブタ移植実験で得られた病理切片をスコア化したところ、いずれのスコア（Wakitaniスコア、O`Driscoll スコア、ICRSスコア）においても、移植においてスコア値の有意な改善が認められた。さらに、HLAホモドナー由来iPS細胞より作製した組織体について、その造腫瘍性を評価するために、免疫不全ラット（SCIDラット）への膝関節欠損部に移植実験を行った。移植3か月、12か月目に移植部を回収し、組織学的に解析したところ、複数のiPS株由来の組織体において膝関節欠損部に生着し、造腫瘍像は観察されなかった。