本研究は、EYS遺伝子のS1653Kfs変異に対する世界初のin vivo変異特異的ゲノム編集遺伝子治療の臨床応用を目的とし、非臨床POC取得のために必要な治療ベクターとヒト疾患モデルの確立を目的とする。令和4年度において、治療ベクターの最適化を行い、当初の目的を達成した。今年度は、ヒト疾患モデルの作製を行った。
　有効性を評価するヒト疾患モデルについては、培養細胞とゼブラフィッシュモデル、及びマウスモデルの作製を行った。培養細胞モデルは、ヒト網膜由来細胞へ対象変異を導入することで作製を行い、変異株の構築に成功した。作製した細胞株を用いて変異の病理学的影響の検討とRNAseqによる視細胞変性の分子学的バイオマーカーの探索を行い、視細胞変性のバイオマーカー候補と成り得る分子を同定した。また、ゼブラフィッシュはEys欠損により網膜変性をきたすことが示された唯一のモデル動物である。そこで、内在性のEysを欠失しかつS1653Kfs変異を有するヒトEYSを持ったゼブラフィッシュの樹立に取り組んだ。現在、ヒトEYSを持ったゼブラフィッシュを作製中であり、前年度に作製した内在Eysを欠失させたゼブラフィッシュと交配することでモデルが完成する予定である。加えて、ゼブラフィッシュ以外の哺乳類を用いた第２のヒト疾患モデルとして追加支援により構築したヒト化EYSモデルマウスの評価を行った。網膜組織に異常はなく、ゲノム編集効率を評価可能なことを確認し、in vivo評価モデルの構築に成功した。ヒト疾患モデルを2つ以上確立という目標に対して、培養細胞モデルとマウスモデルを確立し、目標を達成することができた。
　以上のように、ベクターデザインの決定とヒト疾患モデルを確立し、設定したマイルストンを全てクリアすることができた。さらに継続して開発を進めており、これまで治療不能だったEYS遺伝子異常によるRPに対する初の治療薬となる可能性がある。