【代表：千葉大学】
　当初の研究計画に従って研究を遂行した結果、令和4年度に、我々は、開発したexon skipping ASOの臨床応用において重要なin vivoモデルとなるWRN遺伝子をヒトWerner Syndrome (WS) 変異4型に置換した新規のマウスモデルを創出することに成功した。このマウスは、当初の計画よりも早期に開発でき、ホモアレルで遺伝子改変された個体も得られたため、実験に活用するための早期繁殖も完了した。また、追加配賦予算で受け取った資金を有効活用し、マウス全ゲノムシークエンスでの解析を行い、目的の箇所でゲノム編集が行われていること、および挿入ヒト配列のランダムインテグレーションが見られないことを確認した。一方、エクソンスキッピングによって発現誘導される短縮型WRNタンパク質の機能解析のために、野生型WRNと様々なWS変異型WRN（ヘリカーゼドメインミスセンス変異、ヌクレアーゼドメインミスセンス変異）の発現ベクターを構築し、WRN分子機能解析（ヘリカーゼ活性、DNA結合活性など）のためのリコンビナントタンパク質の合成を行った。またChIPseqの解析結果から、エクソンスキッピングによって発現誘導される短縮型WRNタンパク質が、野生型WRNタンパク質と同等の機能を有することを確認した。令和5年度には、上記マウスに対して我々の開発したASOを投与するin vivo概念実証実験を行い、in vivoにおいても想定通りexon skippingが行われることを確認した(POC確立)。加えて、上記の短縮形WRNリコンビナントタンパク質が野生型WRNと遜色ないヘリカーゼ活性やDNA結合活性を有することを明らかにした。さらには本研究課題に関して研究班会議を実施し、知財戦略だけではなく臨床試験の概要に関しても本学知財戦略部・臨床試験部およびWSを含む早老症の厚労省研究班の助言を頂き、計画の策定を進めた。総じて2024年度から実施予定の非臨床安全性試験に当たり、必要な準備を推進できた。
　【分担機関：国立成育医療研究センター】
　早老症ウェルナー症候群は本邦における指定難病であり、根本的な治療法は存在しない。これまでに報告された本疾患の症例報告はその多くが本邦由来であり、我が国がリーダーシップを取って病態解明・治療法開発を進めることに大きな妥当性と優位性がある疾患である。本研究は早老症ウェルナー症候群を対象に、アンチセンスオリゴ核酸を用いた画期的な治療法を開発することを目的としている。我々は日本人ウェルナー症候群で最も多い変異であるWRN遺伝子変異4を対象とした治療介入が、ウェルナー症候群患者由来細胞の細胞老化を抑制しうることを見出している。一方で、これまでウェルナー症候群では好適な動物モデルが存在せず、本治療法の動物を用いた検証は不可能であった。我々は、ヒトWRN遺伝子変異4を搭載したヒト化マウスを新たに作成することで、動物における治療効果の判定が可能となると考え、同マウスの作成をCRISPR/Cas9技術を用いて試みたところ、令和4年度に、予定よりも早期に同マウスを作出することに成功した。さらに、全ゲノムシークエンスにおいても目的の箇所で遺伝子が改変されていることを確認した。令和5年度にはこのマウスを用いたin vivoにおける実証実験を行い、in vivoにおけるPOCの確立に成功した。本成果を今後の非臨床安全性試験および医師主導治験へと繋げる予定である。