研究開発項目：快・不快情動の比較解析と末梢生理反応解析（研究代表者：片岡直也）
R５年度は、前年度開発した低侵襲マルチファイバフォトメトリーを用いた網羅的神経回路データの取得とその解析方法の検討を行った。さらに、心理ストレス性交感神経反応の出力亢進を制御する視床下部神経細胞がストレス下でどのような活動変化を起こしているか解析するため、バルクRNA-seq を行った。
　低侵襲マルチファイバフォトメトリー解析では、血圧・脈拍測定用送信機を埋め込んだマウス脳内の前頭前皮質を中心とした６カ所にGCaMP8 を発現させ、各脳部位へ光ファイバーを留置した。刺激方法として「社会的敗北ストレス」、「拘束ストレス」と「フットショック」を行っている。いずれの刺激に対しても神経活動の活性化と共に末梢生理反応の上昇が観察された。前頭前皮質と各脳領域とのつながりを解析するため、神経活動変化から結合強度を算出した結果、ストレスによって各脳領域間に同期活動が認められ、高い結合強度を示すと同時に心血管系にも変化が観察された。これらの反応はストレスを受けていない動物では観察されない。社会的敗北ストレスを与えたマウス視床下部神経細胞の遺伝子解析を行った結果、様々な遺伝子の上昇が確認された。さらに、拘束ストレスを与えたSLE発症直後のSLEモデルマウス視床下部scRNA-seq を行った結果、こちらも特徴的な遺伝子上昇が観察された。今後は発現上昇した上位１０個の遺伝子について視床下部内でノックダウンを行う事で末梢の生理反応並びに免疫細胞の動態解析を行う。
SLE病態マウスの病態解析と末梢免疫細胞の遺伝子発現解析（研究分担者：伊藤綾香）
昨年度、拘束ストレスによる抗体産生の影響を検討するため、T細胞依存的に抗体産生を誘導する抗原（NP-KLH）を投与した結果、拘束ストレス負荷によりNPハプテンに対する特異的抗体を産生する細胞数が有意に増加していたことが明らかとなったことを踏まえ、心理ストレスがSLE病態の増悪促進ではなく、病態発症のトリガーとして機能するのではないかと仮説をたてた。この仮説を検証するため、病態を発症する前のSLEモデルマウスを快情動環境にて飼育し、病態発症週齢を過ぎた脾臓のFACS解析からSLE病態と相関のある免疫細胞群の割合を調べたところ、一部のT細胞群の活動が減少する結果が得られた。