研究開発項目１　糖鎖修飾を受けるコアタンパク質の同定と生化学的特性の解明
マウス初代培養表皮幹細胞またはトランスジェニックマウスに、加齢に伴って発現上昇する３種の糖修飾酵素（St3gal2、St6gal1、Man1a）を単独または同時に発現させることで、高齢型の糖鎖パターンを誘導した。細胞から抽出した膜タンパク質を材料にレクチンプローブ（rHeltuba、rGal8N、SNA）を用いたレクチンブロットにより、それぞれの糖修飾酵素により糖鎖変化が起こっていることを確認した。α2-6シアル酸に結合するSNAを用いた免疫沈降・質量分析を行い、コアタンパク質の候補を同定した。本解析は、熊本大学で実施した。
研究開発項目２　高齢型糖鎖パターンを持つ老化モデルマウスの作出と解析
高齢皮膚で見られる糖鎖を持つトランスジェニック（Tg）マウスを作出し、高マンノース型からシアル酸を含む複合型へ糖鎖修飾パターンが変化することで皮膚や表皮幹細胞の老化が加速される可能性について検討を行った。令和４年度に引き続きSt3gal2、St6gal1、Man1a Tgマウスの皮膚の組織学的解析や表皮幹細胞、老化マーカーなどの発現をタイムコースを追って取得した。また、どの細胞で起こる糖鎖変化が老化表現型の誘導に重要であるかを決定するため、全身で発現するRosa-rtTAに加え、表皮特異的なK14-rtTA、真皮特異的なPdgfra-rtTAを使用し、表現型を比較した。皮膚における表現型が見られたSt6gal1 Tgマウスにおいては表皮幹細胞を単離し、RNAseq解析を行った。その結果、分子レベルにおいても、表皮幹細胞で加齢関連の遺伝子シグネチャの発現が変動している可能性を見出した。本解析は、マウス皮膚を用いた組織レベルでの表現型解析を熊本大学で行い、オミクス解析を含む分子レベルでの解析を九州大学で行った。
研究開発項目３　糖鎖プロファイリング技術を利用したヒト表皮幹細胞老化マーカーの同定
ヒト初代培養表皮幹細胞から抽出した膜タンパク質を用い、レクチンアレイを行った。主成分分析により加齢による糖鎖変化の全体的な傾向を解析し、年齢による糖鎖変化がヒト細胞においても生じていることが分かった。本解析は、熊本大学と九州大学で実施した。