肝がんの発症機序に関して、慢性肝障害を背景にがん遺伝子の持続活性化に伴い正常肝細胞からがん幹細胞（CSC）の性質を持つ細胞へのがん性形質転換が肝発がんのカギとなると考えられる。本研究ではMYCNを含めCSCマーカー遺伝子の発現動態を指標とし、in vitroケミカルゲノミクス解析とin vivo空間オミクス解析により、肝CSCマーカー遺伝子の持続活性化の仕組みの解明と共に、それを標的とした薬剤候補並びにCSC可視化の動物モデルや肝がんバイオマーカーの創出を目的とする。最終年度では、１）マルチオミクス解析により、ケミカルスクリーニングから得られたMYCN発現阻害剤の標的同定を実施し、TGF-βスーパーファミリーに属するシグナル経路との関連を見出した。さらに、経口・静脈注射・腹部注射で野生型マウスに投与し、質量分析による血中濃度を測定し、MYCN発現阻害剤の体内動態を評価した。2）空間トランスクリプトーム解析を用いて、非アルコール性脂肪性肝炎モデルマウスの肝組織においてMYCN高発現領域（MYCN niche）の同定に成功した。MYCN niche特徴因子を抽出し、IPAパスウェイ解析を用いて、Wnt/β-cateninシグナル経路に属する因子YがMYCN高発現領域で亢進していることが分かった。The Cancer Genome Atlasデータベースによりヒト肝がん組織ではMYCNと因子Yとの遺伝子発現の間に有意な正の相関が見られ、因子YのノックダウンによりMYCNのプロモーター活性並びに内因性MYCN遺伝子発現をいずれも抑制した。さらに、機械学習を用いて、MYCN nicheの特徴遺伝子発現プロファイルに基づいた肝がんの予後層別化の確率スコアの算出を試みた。肝がん予後関連MYCN nicheスコアを用いて、患者予後の層別化に成功した。３）Mycn遺伝子の終止コドンの直前にGFP蛍光タンパク質の配列の挿入に加えて、MYCN発現細胞の系統追跡が可能とするinducible Cre部位特異的組換えシステムも導入したMYCNノックイン追跡マウスの作製に成功した。免疫染色では肝組織中血管隣接領域にGFP発現細胞が観察できた。