本研究は、栄養環境に伴う肝細胞死の様式変容とその生活習慣病発症・増悪のメカニズムの解明を目的としている。昨年度までに、脂肪肝の重症化に伴う細胞死の新規な様式変容を解明した。具体的には、１）脂肪肝の重症化により、肝細胞死がアポトーシスからネクロプトーシスに変化すること、２）その制御には、ストレス誘導性転写因子ATF3によるネクロプトーシス制御因子RIPK3の発現誘導が重要であることを明らかにした。さらに、３）ネクロプトーシスの発症とヒト代謝異常性脂肪肝炎発症の相関を見出した。本年度は、ATF3依存的ネクロプトーシスを誘導する過栄養環境模倣条件の検討、及び肝細胞死様式変容のバイオマーカーの探索を進めた。
培養肝細胞株及び初代培養肝細胞を用い、ATF3依存的ネクロプトーシスを誘導する過栄養環境模倣条件の検討を進めた。本検討に伴い、RIPK3発現依存的に分泌型アルカリフォスファターゼ（SEAP）を発現するRIPK3モニターマウスを利用した、RIPK3発現候補因子のスクリーニング系を確立した。具体的には、モニターマウス由来初代培養肝細胞を用い、候補因子処理後の培地中SEAP活性の測定により行った。実際、本研究課題でRIPK3を誘導することを明らかにしたATF3過剰発現により、培地中SEAP活性が上昇した。これまでに、過栄養環境模倣条件によるネクロプトーシス誘導は、培養肝細胞レベルで再現されていない。このスクリーニング系の確立は、病態に関与する細胞死様式の発症メカニズムの解明の為の新たなin vitroモデルとして、非常に有用なツールとなりうる。肝細胞死様式変容のバイオマーカーの探索の為、高度脂肪肝ATF3欠損マウスのトランスクリプトーム解析を行った。さらに、ネクロプトーシス誘導前後のトランスクリプトーム解析を行い、高度脂肪肝マウスのトランスクリプトーム解析との差分を検討する為、肝RIPK3モニターマウスを用いて、メチオニン・コリン欠損餌負荷後の発現時期の解明を進めた。