遺伝子改変マーモセット作製にかかる革新的胚操作システムの開発は、１）マーモセット成熟卵子・受精卵の安定的生産方法の開発、２）異種間移植卵子を用いた脳疾患モデルの作製、３）ナイーブ化ES細胞の樹立と胚盤胞補完法による遺伝子改変動物の作製の３項目について進めてきた。本研究開発の最終年に当たる本年度は次のような進捗と成果があった。まず、マーモセット成熟卵子・受精卵の安定的生産方法の開発に関しては、免疫不全マウスに移植したマーモセット卵巣組織から効率的に卵子を取得し、体外受精可能な成熟卵子を生産する方法を確立した。この卵子を使って体外受精を行い、得られた胚を子宮移植可能な胚盤胞まで発生させる方法の開発に成功した。ここまでの成果は、Scientific Reports(2023)13:18196に発表したが、霊長類卵巣から子宮移植可能な後期胚を生産できるということから、複数の新聞などに取り上げられ注目を集めた。なお、得られた胚をマーモセット子宮に移植し産子生産を試みた。５度の移植で、２頭の仮親メス個体で血中プロゲステロン高値を示し着床が予見されたが、超音波エコー検査では、明確な着床像を得ることはできず、途中で流産したと思われる。さらに、ラット卵巣を免疫不全マウスに移植し、マウス体内で成熟した卵子を用いて体外受精で産子ができることを世界で初めて示した。この成果は現在投稿中である。２）項目目の異種間移植卵子を用いた脳疾患モデルの作製では、研究開発（１）で生産したマーモセット受精卵を用いて、ⅰ）遺伝子編集方法の至適化をはかり、ⅱ）モデル動物の生産を進める計画であった。しかし、（１）で確立した手法で生産された状態の良い受精卵は限られており、産子生産実験を優先したために、本実験に使用できるものは少なく、マーモセット受精卵での遺伝子編集方法の至適化には至らなかった。３）項目目のナイーブ化ES細胞の樹立と胚盤胞補完法による遺伝子改変動物の作製に関しては、遺伝子改変したラットES細胞を用いて、胚盤胞補完法により作製した精子から顕微授精の手技により産子生産を行う方法を確立した。その成果は、現在論文投稿準備中である。また、マーモセットのES細胞ナイーブ化は、様々な因子の強制発現系なども試したが、マウスに高効率でキメラを作製できる細胞株を樹立することは、能わなかった。