局所切除（断端陰性の完全一括切除）後のpT1結腸・直腸癌で、非治癒因子(①T1b(SM浸潤度 1000um以上)、②脈管侵襲陽性、③低分化腺癌・印環細胞癌・粘液癌、④浸潤先進部の簇出(budding) Grade2/3)のためリンパ節郭清を伴う追加大腸切除が予定されている症例を対象とした新たなコホート(コホートD:DENEB study)をGALAXY試験内で立ち上げ、それぞれの施設の倫理審査委員会で承認を得た後、研究機関の長の許可を受けた施設から登録を開始した。GALAXY試験参加施設に対して年2回のBoost up meetingを行いながら症例登録の促進に努めたが、COVID-19の感染拡大により登録数が伸び悩んだ。AMEDからもアドバイスをいただき、積極的に各施設と連絡を取りながら症例集積を行い、予定の令和5年3月より2か月遅れの5月末に31施設から208例の登録をいただき登録終了とした。不適格症例を除外した184例を検討した。184例中リンパ節転移を有するStageIIIの症例は23例(12.5%)で期待した割合であった。184人のうち、6人がctDNA陽性であり、6人全員がリンパ節転移陽性であったため、陽性適中率は100.0％であった。一方、ctDNA陰性の患者は178人で、うち161人はリンパ節転移を認めず、陰性適中率は90.4％であった。リンパ節転移の検出におけるctDNAの全体の診断一致率は90.8％ (95%CI, 85.6-94.5%)であった。局所切除後のctDNAが陽性となれば、非常に高い割合でリンパ節転移を伴うことが予想され、手術を強く推奨する根拠となり、臨床上も意義のあるデータと考える。しかし、感度は期待していた値よりも低く、本来の本試験の目的である不要な追加大腸切除を減らすためにはより感度の高い検査が必要である。腫瘍組織のwhole exome sequencingを行い、検出された腫瘍特異的な一塩基多型（Single nucleotide variant）から独自のプログラムにより16個の体細胞変異を抽出し患者個々のパネルを作成し、術後に得られた血液からctDNAを抽出し、腫瘍由来の体細胞変異の有無を検出する検査システムである現在のSignateraよりさらに感度を向上させるために、A社と相談し腫瘍組織のwhole genome sequencingを行い16個以上の体細胞変異を抽出する新たに開発された検査システムを用いて再解析を行っている。本試験のプロトコール論文が、Cancer Science (2022 113(4):1531-1534.)にアクセプトされた。また本結果に関して、American Society of Clinical Oncology (ASCO) Gastrointestinal Cancer Symposium (2024)で発表を行い、高い評価をいただいた。