本課題における令和４年度の各研究開発項目とその成果は以下のとおりである。
(1)被験物質の製造
GMP対応の製造を想定し、試験用ペプチド合成をA社に委託した。研究開発項目(2)で使用する抗原用ペプチド合成は同ペプチド合成の実績を持つB社に委託した。A社において、non-GMP製造で純度90% (HPLC)、45 mgのペプチドを得た。しかし、同ペプチドはPBSへの溶解性が低く、不要物を認めた。pH調整により、溶解性は改善されたものの、完全溶解には至らなかった。不溶物を遠心・濾過で除いたペプチド溶液に　(HPLCのピーク値から濃度を推定)を用い、in vitro活性評価を実施し、石灰化阻害活性を持つことを確認した。本項目のマイルストーンは達成したが、A社由来のペプチドの難溶解性の要因と不要物の構造確認はできていない。
(2)被験物質測定法開発
被験物質の微量測定系の構築に利用するニワトリ抗体を得るため、被験物質または被験物質-KLHコンジュゲートをニワトリに免疫した(後者はC社に委託)。いずれも抗体価の上昇を認めたため、血清、脾臓を採取した。被験物質-KLHコンジュゲートを免疫したニワトリの抗血清を用い、競合法による被験物質の測定を試みたが、十分な測定感度は得られていない。被験物質を免疫したニワトリの脾臓からRNAファージライブラリを作製し、組換えモノクローナル抗体の作製を試みている。本年度のマイルストーンはほぼ達成した。
(3)慢性腎臓病-骨ミネラル代謝異常(CKD-MBD)モデルの構築と最適化
C57BL/6Jマウスにアデニンおよび高リン食を給餌し、血管石灰化の発生部位・頻度を解析した。同様に血液生化学検査および骨形態計測パラメータを評価した。CKD-MBDと関連するcalciprotein particles (CPPs)の測定系を構築し、CKD-MBDと血中CPPsの相関性を確認した。複数の検査項目を測定するための追加試験等を継続中である。
(4)非臨床安全性試験計画の作成
計画書の作成には至っていないため、マイルストーン未達である。