インフルエンザウイルス感染細胞内で子孫ウイルスゲノム-タンパク質複合体（vRNP）と宿主因子であるRab11で形成されるウイルス液滴についてin vitro、in vivo両面から解析を行った。
細胞におけるウイルスタンパク質液滴形成の意義解明
RNA相互作用網羅的同定系を用いて感染Rab11ドミナントネガティブ発現細胞や核外輸送の阻害剤であるleptomycin B処理感染細胞内における分節RNA網羅的相互作用同定を行い、ウイルス粒子内で形成される分節RNA相互作用ネットワークとの比較を行った。この結果、両条件ともウイルス粒子内で形成された相互作用と同一の分節間相互作用が検出された。本実験を行った条件においてvRNPはRab11機能不全の状態でも液滴を形成すること、leptomycin B処理により核内で各分節は一様に存在することから、局所的な分節RNAの濃度上昇により分節間の相互作用ネットワークが形成されると考えられる。
試験管内におけるウイルスタンパク質液滴形成解析
vRNPとRab11Aで形成されるウイルス液滴について、in vitroでの再構成と高速AFMを用いた構造解析を行った。精製したRab11A とvRNPの混合物はPEG存在下、相分離して顆粒を形成した。この顆粒形成はRab11A単独でも観察された。続いてRab11Aのみを高速AFM観察したところ、マイカ基盤上でRab11Aはきれいな球状の会合体を形成すること、会合体同士が融合する性質があることが明らかとなった。すなわちRab11Aは単独で相分離する性質があると考えられる。続いてvRNP-Rab11A混合物の高速AFM観察を行ったところ、vRNPがランダムな向きでRab11A会合体に組み込まれている様子が明瞭にとらえられた。
LLPS阻害剤
これまでにLLPSを促進する活性を持つ結果が得られているC4N4についてさらなる誘導体合成を行ったところ、長い炭素鎖を持つ誘導体で化合物単独で液滴形成が見られた。この化合物液滴に対して精製Rab11やvRNPを加えたところ、Rab11は化合物液滴に取り込まれるがvRNPは取り込まれない事が明らかとなり、Rab11液滴とは異なる性質の液滴にはvRNPが取り込まれない事が示唆された。