令和4年度は発達障害モデルの表現型の確認を継続した。モデルマウス由来神経細胞を培養し、神経細胞の神経突起形成能や、神経細胞の細胞体サイズ、細胞内シグナル活性化レベルを評価した。その結果、標的疾患発達障害モデルでは正常な神経細胞と比較して異常な神経突起伸長の亢進や、細胞体サイズの増大、細胞内シグナル活性化レベルの増強が確認された。標的疾患の原因メカニズムを検証するため、令和3年度は原因遺伝子Xの発現を抑制するノックダウンベクター2種類を構築することに成功してきた。そのため本年度は検証を継続し、これらのノックダウンベクターをモデルマウス由来神経細胞に導入し表現型を評価した。原因遺伝子Xのノックダウンにより、異常な神経突起伸長の亢進や、細胞体サイズの増大、細胞内シグナル活性化レベルの増強が改善された。これらの結果より、本疾患の異常な表現型は原因遺伝子Xの異常な発現亢進により引き起こされていることを検証することができた。加えて、原因遺伝子Xの下流因子が病態に寄与しているのかを調べるために、発達障害モデルニューロンに原因遺伝子Xの下流因子に対するインヒビターを発現させ表現型の改善を評価した。原因遺伝子Xの下流因子に対するインヒビターの発現により表現型の改善がみられた。また、発達障害モデルニューロンの神経活動について表現型の解析を行なった。その結果、発達障害モデルニューロンでは神経活動の亢進および同期性の増加がみられた。そのため、これらの異常な神経活動による薬効の評価系の構築が可能なことを示している。