本研究課題は、溶連菌が感染した際の翻訳動態の変化を追跡することを目的とする。本研究で使用する溶連菌は、貪食細胞だけでない上皮細胞内にも感染することができ、感染した際に分泌毒素NAD-glycohydrlsase (Nga)を用いて宿主翻訳動態を制御することを明らかにしている。本研究では、溶連菌の有する分泌毒素Ngaによる宿主翻訳の制御メカニズムを、Ribosome profilingやirCLIP-seqを利用して解明する。
　本年度では、まずNga毒素による翻訳制御の感受性の高い、つまり標的遺伝子を同定することを試みた。そこで溶連菌を感染させた際の翻訳動態を調べるために、リボソームプロファイリングを行った。感染時間に応じた翻訳動態を調べるべく、HeLa細胞へ溶連菌を感染させた後、感染経時的に細胞を破砕し、これらのサンプルを用いてリボソームプロファイリングを実施した。その結果、1h、２h、４hの感染時間における翻訳動態を捉えることに成功した。その結果、選択的に翻訳が減少する転写産物が存在することを特定した。その遺伝子の機能分類群をカテゴライズするGene ontology解析から、リボソーム生合成に関与するGOの翻訳が減少していることがわかり、翻訳動態への抑制効果と関連する結果が得られた。また、興味深いことに、翻訳が低下したGOには細胞分裂に関係するGO（スピンドルアセンブリなど）がエンリッチしていることがわかり、感染時において細胞分裂の抑制が起きていることが示唆されている。次に、irCLIPseqを用いて、Ngaが結合する標的R N Aを同定を試みた。溶連菌の感染細胞をUVによるクロスリンクによりRNAとタンパク質を架橋し、免疫精製したものをNuclease S1で部分消化し、RNAを精製したものをシーケンスした。その結果、マッピングのできない短い核酸が濃縮されていることが明らかとなった。この原因は、Nuclease S1による過剰な切断にあると考え、S1の濃度を変更して、実験を再検討している。