主要NTM症起因菌に特異的な蛋白質、すなわち診断候補抗原の遺伝子を調整し、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ（GST）との融合蛋白質で発現する組換え体を作成した。GSTとの融合部位にはプロテナーゼ認識サイトを導入し、後に診断候補蛋白質のみを切り出せる構築とした。グルタチオンカラムを用いた組換え体のアフィニティー精製を行ったが、他蛋白質の混入が認められた。そこで純度をあげるために、イオン交換カラムクロマトグラフィー、さらにゲル濾過カラムクロマトグラフィーを行い高純度に精製した。精製した特異抗原2種を、マウスに免疫し、ハイブリドーマを作成した。2抗原につきそれぞれ、21および10クローンの、組換え蛋白質を認識する単クロナール抗体産生ハイブリドーマを得た。選抜した診断候補抗原が実際に本邦のNTM症患者由来臨床分離株において保存されているかを、選抜遺伝子を検出するTaqmanプローブとプライマーを作成して試験した。まず、標準NTM株と結核菌DNAを用いて感度と特異性を検討し、NTM菌種を特異的に検出するプライマーープローブセットを決めた。NTM症と診断された患者由来134分離菌株よりDNAを抽出して、qPCRにより候補遺伝子の有無と診断精度を検討した。質量分析による同定・同定結果との一致率を比較したところ、94〜98%前後の一致率が確認され、診断候補抗原遺伝子が本邦のNTMに保存されていること、および核酸診断でも喀痰中のNTM菌種を高い精度で検出できることが分かった。
大阪刀根山医療センターで2020年1月1日〜2022年12月31日に抗GPL-core IgA抗体を測定した残余血清 (n=2571)は、肺NTM症以外の疾患患者由来(n=1674)と、肺NTM症と確定診断された患者由来 (n=897)よりなる残余検体（血清、抗酸菌培養液、喀痰）を用いて試験を行うことについて、大阪刀根山医療センター倫理委員会の承認を得た (TNH-2020021)。本研究によって作成された臨床情報を紐づけられた本血清バンクは、今後の研究基盤となり、今後得られる測定値と臨床データとの関連を検討する予定である。