申請時の本研究計画は以下の通りである 1）ヒト正常細胞におけるNO刺激による遺伝子発現変化の解析 2）NOによるDNMT3不全を介した遺伝子発現と治療候補薬DBICの効果検証 3）誘導遺伝子のプロモーターCpGアイランド脱メチル化と治療候補薬の効果 4）ヒト臨床サンプルを用いた解析 5）データベースを活用した候補遺伝子の機能解析 6）候補遺伝子発現と形質転換に対する治療候補薬DBICの薬理効果の検証
1のヒト正常細胞におけるNO刺激による遺伝子発現変化の解析に関しては、複数のヒト正常肺気道細胞にNO刺激を処理し、RNA-seq解析を行った。得られた候補遺伝子についてはNOの処理濃度・時間依存性について検証し、エピゲノム変化が起きる48時間後以降に遺伝子発現変化が起きることを突き止めた。2のNOによるDNMT3不全を介した遺伝子発現と治療候補薬DBICの効果検証については、1で得られた候補遺伝子のDBIC処理時における変化を解析した。代表的な遺伝子の１つであるCA9はDBICの処理によって、NOによる発現上昇が抑えられることを明らかにした。3の誘導遺伝子のプロモーターCpGアイランド脱メチル化と治療候補薬の効果検証については、ヒト正常肺気道細胞にNO刺激と同時にDBICを処理した際のDNAメチル化パターンの変化をホールゲノムバイサルファイトシークエンスによって解析を行った。NO刺激によって得られるDNAメチル化パターンの変化がDBICの処理によって抑制されていることを明らかにした。4のヒト臨床サンプルを用いた解析については、岡山大学病院に受診したCOVID19後遺症患者検体48例ついては血漿中のNOレベルの解析およびq-PCR解析を行った。血漿中NOレベルについては、COVID19患者において有意な上昇が起きていることが明らかとなった。5のデータベースを活用した候補遺伝子の機能解析については、ヒトのCOVID19患者におけるDNAメチル化パターンの変化についてデータを入手している。NO処理によるトランスクリプトーム・DNAメチル化パターンの変化について一部解析を終えており、引き続きバイオインフォマティクス解析を続けていく。６の候補遺伝子発現と形質転換に対する治療候補薬DBICの薬理効果の検証ではモデル細胞の樹立に問題があったため、共同研究者との共同開発によってiPS細胞を用いたモデル細胞を樹立し、治療候補薬DBICの薬理効果を検証する予定である。
以上より、概ね申請時の計画を遂行した。